Verso La Costruzione Di Vettori Per Il Trasferimento Genico Negli Invertebrati

Di rosa corigliano

Il lavoro l ho fatto in genetica, consiste nella costruzione di alcuni plasmidi ricombinanti da usare nel trasferimento genico.la procedura consiste nell'inserire materiale genico in un cell.o organismo ricevente.La più efficace dimostrazione di tale procedura è la terapia genica. Un metodo in uso attualmente è usare gli elementi trasponibili SB. In laboratorio ho identificato un membro della classe degli elementi trasponibili SB che può essere usato come vettore.
Il mio compito è stato quello di costruire questi plasmidi togliendo in un caso in gene della trasposasi e sostituendolo con un gene marker e nell'altro caso mettere la trasposasi sotto promotore a sistemi controllati di Drosophila.I geni marker usati sono la blasticidina , lucifersi, e GFC. I promotori per il secondo sistema sono derivati dall'actina. Le serie dei plasmidi sono state controllate, sequenziate e pronte per essere ustae.
la trasfezione venuta in seguito non ha però prodotto risultati positivi ad oggi.

• Lingua: Italiano
• Editore: Rosa Corigliano
• Data di uscita: 20 dic 2011
• ISBN: 9788863692716

Anteprima del libro

UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI BARI

FACOLTA’ DI SCIENZE

CORSO DI LAUREA IN SCIENZE BIOSANITARIE

DIPARTIMENTO DI GENETICA E MICROBIOLOGIA

TESI DI LAUREA SPERIMENTALE

IN GENETICA

VERSO LA COSTRUZIONE DI VETTORI

PER IL TRASFERIMENTO GENICO

NEGLI INVERTEBRATI

Relatore

Chiar.mo Prof. Ruggiero Caizzi

Laurenda :

Rosa CORIGLIANO

ANNO ACCADEMICO 2007/2008

Verso la costruzione di vettori per il trasferimento genico negli invertebrati

Rosa Corigliano

Narcissus - Self Publishing made serious

Edizione digitale: dicembre 2011

ISBN: 9788863692716

---

Edizione digitale realizzata da Simplicissimus Book Farm srl

---

INTRODUZIONE

La manipolazione genetica degli organismi è una procedura ormai consolidata e diffusa nel campo della biologia. Lo sviluppo di queste attività deriva dalle tecniche di analisi del DNA iniziate negli anni ’70 poi proseguite fino ad oggi con nuove e più sofisticate tecnologie che vengono comunemente definite di Ingegneria Genetica.

Gli obiettivi della manipolazione genetica possono essere essenzialmente di due tipi:

a)        di natura prettamente scientifica, per esempio per la identificazione, clonaggio e caratterizzazione di geni di interesse.

b)        di natura applicativa, ossia la capacità di intervenire sul genoma di uno specifico organismo per applicazioni mirate in campo di interesse agronomico-alimentare o anche biomedico (Terapia genica).

Per quanto riguarda la terapia genica nell’uomo, questa tecnica è volta a sopperire i disordini acquisiti in un organismo e consiste nell’introduzione di un gene funzionale nel genoma di una cellula target in modo tale da sopperire, prevenire o correggere una condizione patologica.

Tale tecnica non è altro che un procedimento terapeutico che designa una serie di procedure molecolari volte a correggere la disfunzione in una cellula bersaglio. Essa ha scopi scientifici ma trova applicazioni in campo farmacologico e agroalimentare.

Nel caso di malattie genetiche viene utilizzata per trasferire la versione funzionante di un gene in modo da rimediare al difetto, mentre in altre patologie come la terapie contro il cancro si usa per uccidere in modo mirato le cellule patologiche.

Il trasferimento genico in cellule animali è praticato inoltre per compiere sia studi funzionali e di regolazione sia per la produzione di grandi quantità di proteine ricombinanti.

LE CONDIZIONI DEL TRASFERIMENTO GENICO

Ai fini del trasferimento genico bisogna dapprima considerare i due principali fattori che sono coinvolti nel processo, ossia

-  il tipo di cellule da trattare

-  il vettore da utilizzare.

Le cellule ospiti sono generalmente dei seguenti tipi:

Linea germinale

(spermatozoi, oociti)

Cellule staminali totipotenti

(primi stadi dello sviluppo embrionale)

Linea somatica

(da tessuto, cellule coltivate in vitro)

Il trasferimento genico stabile nella linea germinale permette la trasmissione in tutte le cellule della progenie dopo un incrocio e sarà quindi ereditaria, mentre negli altri due casi la nuova condizione interessa solo l’organismo trattato e non sarà ereditata nelle generazioni successive.

Per quanto riguarda i metodi utilizzati per l’introduzione di DNA esogeno in una cellula ricevente esistono tutt’oggi diverse procedure alcune delle quali utilizzano vettori specifici. Questi ultimi vengono distinti nelle seguenti categorie:

Virali Integranti (retrovirus, lentivirus, adeno-associati)

Virali Non Integranti (adenovirus, herpesvirus)

Non virali (liposomi, lipoplessi, lipidi cationici)

Esistono inoltre altre procedure in cui si utilizza:

DNA (DNA plasmidico nudo, polimeri cationici)

Cromosomi artificiali

pistole geniche (gene gun)

LE TECNICHE PER IL TRASFERIMENTO GENICO

Il trasferimento genico si può realizzare in diversi modi. L’approccio più immediato è il trasferimento diretto del DNA, che in vivo si realizza per esempio mediante la microiniezione, mentre nelle cellule coltivate in vitro si può ricorrere per esempio con il bombardamento di microsfere metalliche ricoperte di DNA. Questo approccio è detto trasfezione e comprende una serie di metodi sia chimici che fisici mediante i quali le cellule inglobano